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生物技术专业介绍

更新时间:2016-06-17 15:51:17点击?#38382;?/small>873次
  生物技术专业介绍在 病原体急性感染的诊断中,通常需检测IgM抗体,如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的,如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用 间接法测IgM抗体时,由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体,其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合,从而干扰IgM抗体的检 测。
  在 生物技术专业介绍病原体急性感染的诊断中,通常需检测IgM抗体,如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的,如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用 间接法测IgM抗体时,由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体,其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合,从而干扰IgM抗体的检 测。
因 此,在使用间接法测定IgM抗体时,通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理,以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐,而且影响测定的特异性 和灵敏度。目前,常用的IgM抗体检测方法为捕获法,即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体,当加入血清标本时,其中的IgM类抗体(特异的和非特 异的)即可被固相抗体捕获,再加入特异抗原,其与固相上捕获的IgM抗体结合后,加入酶标抗特异抗原的抗体,最后加入底物显色。具体操作步骤如下:
1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸?#20301;?#20914;液中40℃下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。
2.加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体?#20174;?#32780;吸?#25509;?#22266;相上。
3.加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育一定时间后洗板;此时,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生?#20174;Α?br /> 4.加入酶标记的抗特异抗原的抗体,温育一定时间后洗板;此时,在固相上即形?#19978;?#24212;的抗原抗体复合物。
5.加入酶底物,温育显色测定(如图)。
本 方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u链抗体结合,并可与随后加入的酶标抗体(动物 IgG)?#20174;Γ?#20174;而导致假阳性?#20174;Α?#32780;非特异IgM由于其在第一步温育中,可与特异IgM竞争与固相抗体结合,所以会影响测定的灵敏度。因此,使用本法测 IgM,必须对临床样本进行适当稀释。样本稀释后,上述产生干扰作用的非特异IgM含量减少,而特异IgM由于处于相应病原体的急性感染期,滴度很高,一 定稀释后,不会有明显影响,况且,在某些病原体如HBV的慢性感染阶段,IgM类特异抗体也能?#20013;?#23384;在,只不过滴度要低很多。
因 此,如?#27426;?#34880;清样本稀释,就直接检测,即使是没有非特异IgM的干扰,阳性测定结果也没有急性感染的诊断价值。现在,有些试剂生产厂家,为了迎合临床实验 室减轻劳动强度、简便操作的要求,生产了不需对样本进行稀释的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA试剂盒,现有不少实验?#20057;?#22312;使用。鉴于上面提到的 原因,我们建议临床实验室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等类检测时,应使用对样本进行稀释的试剂盒,以保证检测的临床价值。
原文地址:http://www.seekbio.com/biotech/Immunity/elisa/2011/m819333426.html
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